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采用密度梯度離心法分離臍血干細胞

第一、利用 3 種質量濃度的聚蔗糖泛影葡胺分離液分離臍血單個核細胞，用細胞計數法、活細胞染色法及流式細胞計數儀分析單個核細胞的表面標志，以探討密度梯度離心法分離人臍血干細胞分離介質的最佳濃度，建立臨床級干細胞分離應用方案，使用的離心機設備為冷凍低速離心機。

第二、臍血由于其來源容易，所含細胞種類和數量比較多，比骨髓和外周血中的細胞更為原始，且其臨床應用不涉及社會、倫理、法律方面的限制等優勢。臍血間充質干細胞可以分化為成骨、軟骨、脂肪細胞等，內皮干/祖細胞治療缺血性疾病，已經在臨床有突出的療效。

國內、外分離臍血干細胞方法常采用磁珠/流式細胞分選法、臍血庫儀器/羥乙基淀粉沉淀法和密度梯度離心法。由于目的不同，各類方法有其自身特點

第三、臍血庫分離干細胞常用羥乙基淀粉沉淀和儀器離心分離法，分離的細胞量大、成分較多但混有大量紅細胞，適合用作大量分離、儲存干細胞。密度梯度離心法多采用Percoll、Ficoll分離液分離細胞，得到單個核細胞群，該細胞群成分復雜，純度不高。但密度梯度離心法分離臍血單個核細胞由于細胞得率高、方法簡單等突出優點，有望成為制備臨床級干細胞的優選方法，分離介質以聚蔗糖泛影葡胺最為常用。

第四、應用臍血分離干細胞的目的是獲得以干細胞(間充質干細胞、造血干細胞)為主要群體的單個核細胞群。用聚蔗糖泛影葡胺為分離介質研究何種密度狀態下獲得的干細胞最多，目前尚未深入研究。文章在前期工作基礎上，探索密度梯度離心法用3種不同質量濃度分離液分離臍血單個核細胞，比較分離單個核細胞不同亞群的比例和純度，試圖找出用密度梯度離心法獲得干細胞比例和純度較高的分離介質。